北冬蟲(chóng)夏草又名蛹蟲(chóng)草，與冬蟲(chóng)夏草同為蟲(chóng)草屬，是一種名貴的藥用真菌。有多種藥理功能，具有抗癌活性物質(zhì)。我國(guó)是發(fā)現(xiàn)和在醫(yī)藥上應(yīng)用蟲(chóng)草最早的國(guó)家。隨后，歐洲及世界其他各國(guó)才開(kāi)始對(duì)這類(lèi)真菌進(jìn)行標(biāo)本的采集、描述和鑒定。隨著人們逐漸發(fā)現(xiàn)和認(rèn)識(shí)蟲(chóng)草的滋補(bǔ)療效和提高人體免疫功能，它的開(kāi)發(fā)和利用倍受世人的極大關(guān)注，幾年來(lái)蟲(chóng)草研究取得了迅速的發(fā)展。北冬蟲(chóng)夏草草長(zhǎng)5-8公分，金黃、桔黃色，又稱(chēng)北冬蟲(chóng)夏草、北蟲(chóng)草是一種名貴的藥用真菌，與青海冬蟲(chóng)夏草同屬于真菌門(mén)蟲(chóng)草屬，有相似的藥用和滋補(bǔ)功效。國(guó)內(nèi)外對(duì)已經(jīng)成為誘發(fā)蟲(chóng)草子實(shí)體的種類(lèi)研究認(rèn)為，北蟲(chóng)草食用和藥用價(jià)值可與傳統(tǒng)的冬蟲(chóng)夏草媲美，人工培養(yǎng)的北蟲(chóng)草蟲(chóng)草素含量高于傳統(tǒng)冬蟲(chóng)夏草幾十倍?，F(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)研究證明，蟲(chóng)草中含有蟲(chóng)草素、蟲(chóng)草酸以及各種氨基酸等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，具有滋肺補(bǔ)腎、止血化痰、擴(kuò)張氣管、鎮(zhèn)靜、抗各類(lèi)細(xì)菌、降血壓等功效。

　　本發(fā)明的目的在于提供北冬蟲(chóng)夏草菌種培養(yǎng)方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問(wèn)題。

　　為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：北冬蟲(chóng)夏草菌種培養(yǎng)方法，包括如下步驟：

　　1）母種制備：采集野生的鮮北冬蟲(chóng)夏草，用清水輕輕擦洗外表，再用一定濃度汞消毒，用無(wú)菌水反復(fù)沖洗多次，浸泡于一定濃度的乙醇中，用解剖刀在無(wú)菌條件下切去蟲(chóng)體外層，取白色組織于培養(yǎng)基上，在一定溫度下培養(yǎng)7天以后，斜面即長(zhǎng)滿(mǎn)白色絨毛狀菌絲，有淺黃色素產(chǎn)生，即為初始母種，母種需進(jìn)一步培養(yǎng)、扶壯，接著將母種擴(kuò)大培養(yǎng)后，移入固體培養(yǎng)基上，在一定溫度下培養(yǎng)一個(gè)月左右，觀察生長(zhǎng)情況，若見(jiàn)有細(xì)菌或霉菌污染，應(yīng)對(duì)母種進(jìn)一步純化，若無(wú)雜菌污染，可繼續(xù)培養(yǎng)；一個(gè)月后即有橙紅色子實(shí)體產(chǎn)生，說(shuō)明母種可靠，然后，取新鮮菌絲片在培養(yǎng)基表面劃過(guò)，所到之處即有菌落生長(zhǎng)，把長(zhǎng)有菌絲的培養(yǎng)基裝入經(jīng)消毒的瓶中，蓋好瓶蓋，旋轉(zhuǎn)搖晃后培養(yǎng)數(shù)天，可在表面形成許多星狀或斑點(diǎn)狀菌落，即為母種；

　　2）培養(yǎng)基配制：先將去皮馬鈴薯1000g切成蠶豆大小，冷水煮至熟而不爛，用8層紗布過(guò)濾取汁，加入蛋白胨25g、磷酸二氫鉀15g、硫酸鎂7.5g、維生素b4片，補(bǔ)水2500ml，攪拌使其無(wú)沉淀產(chǎn)生，調(diào)節(jié)ph至8，然后依次加入葡萄糖和紅糖煮沸，用濾紙、紗布或棉花趁熱將已配好的培養(yǎng)基過(guò)濾，用紗布過(guò)濾時(shí)，最好折疊成六層，用濾紙過(guò)濾時(shí)，可將濾紙折疊成瓦棱形，鋪在漏斗上過(guò)濾，制成培養(yǎng)液；

　　3）分裝：已過(guò)濾的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行分裝，分裝時(shí)，一手捏松彈簧夾，使培養(yǎng)基流出，另一只手握住幾支試管或玻璃輸液瓶，依次接取培養(yǎng)基，分裝時(shí)，注意不要使培養(yǎng)基粘附管口或瓶口，以免浸濕棉塞引起雜菌污染，液體裝量不宜超過(guò)容器總?cè)莘e的2/5，瓶口用聚丙烯塑料薄膜和乳膠圈封口，備用；

　　4）滅菌：把培養(yǎng)皿和玻璃輸液瓶每10支扎成一捆，用牛皮紙包好放入高壓鍋滅菌，采用常壓滅菌或高壓蒸汽滅菌，高壓蒸汽滅菌0.11mpa保持30分鐘；常壓滅菌100℃保持6～8小時(shí)；高壓蒸汽滅菌一定要等滅菌器的壓力降為零時(shí)，才可以開(kāi)啟滅菌器，取出培養(yǎng)皿和玻璃輸液瓶，備用；

　　6）接種：在無(wú)菌操作條件下，用接種鉤從母種斜面中切取1cm2菌面放入液體菌種培養(yǎng)瓶中，迅速用聚丙烯塑料薄膜和乳膠圈封扎瓶口；

　　7）人工培養(yǎng)：接種后放到恒溫箱里在20～28℃，恒溫培養(yǎng)2～3天，待液體菌種培養(yǎng)液面上的母種塊長(zhǎng)到直徑為2.5cm的菌塊時(shí)，再采用搖床振蕩培養(yǎng)，震蕩頻率依據(jù)搖床性能和菌種性質(zhì)等進(jìn)行適當(dāng)調(diào)節(jié)，要求培養(yǎng)的菌種菌球密度大、菌絲掛瓶壁少、培養(yǎng)周期短以及接種后定殖能力強(qiáng)、發(fā)菌快，一般往復(fù)式搖床60～70次/分鐘，旋轉(zhuǎn)式搖床100～120轉(zhuǎn)/分鐘，振蕩培養(yǎng)時(shí)間為4～6天；沒(méi)有設(shè)備條件的可采用靜止培養(yǎng)，靜止培養(yǎng)時(shí)間為7～10天；

　　8）采收：采收時(shí)，用無(wú)菌鑷子鉗出子實(shí)體，然后再加少量營(yíng)養(yǎng)液，重新包扎好瓶口，繼續(xù)培養(yǎng)，2天后又可生長(zhǎng)出第二批子座。

　　根據(jù)上述技術(shù)方案，所述人工培養(yǎng)菌種的溫度為18～23℃，菌種培養(yǎng)濕度60～65%，菌種培養(yǎng)光線(xiàn)為黑暗條件，菌種培養(yǎng)空氣為環(huán)境清新無(wú)異味。

　　根據(jù)上述技術(shù)方案，所述母種的菌種用真正無(wú)性階段菌株或用成熟的天然的子囊抱子作接種體，具備能滿(mǎn)足蟲(chóng)與菌生理、生化要求的特定條件，使蟲(chóng)菌結(jié)合實(shí)現(xiàn)侵染寄生，以使其長(zhǎng)成蟲(chóng)草子實(shí)體。

　　根據(jù)上述技術(shù)方案，所述人工培養(yǎng)期間定期檢查，一般每天檢查2次，及時(shí)淘汰染菌或劣勢(shì)菌種。

　　與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明有效簡(jiǎn)化了北冬蟲(chóng)夏草菌種的培養(yǎng)方法，繼而可以有效縮短了菌種的培養(yǎng)時(shí)間，提升了生產(chǎn)效率；同時(shí)也優(yōu)化了母種的制備方法，從而可以有效提高菌種的質(zhì)量。

　　下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

　　1）母種制備：采集野生的鮮北冬蟲(chóng)夏草，用清水輕輕擦洗外表，再用一定濃度汞消毒，用無(wú)菌水反復(fù)沖洗多次，浸泡于一定濃度的乙醇中，用解剖刀在無(wú)菌條件下切去蟲(chóng)體外層，取白色組織于培養(yǎng)基上，在一定溫度下培養(yǎng)7天以后，斜面即長(zhǎng)滿(mǎn)白色絨毛狀菌絲，有淺黃色素產(chǎn)生，即為初始母種，母種需進(jìn)一步培養(yǎng)、扶壯，接著將母種擴(kuò)大培養(yǎng)后，移入固體培養(yǎng)基上，在一定溫度下培養(yǎng)一個(gè)月左右，觀察生長(zhǎng)情況，若見(jiàn)有細(xì)菌或霉菌污染，應(yīng)對(duì)母種進(jìn)一步純化，若無(wú)雜菌污染，可繼續(xù)培養(yǎng)；一個(gè)月后即有橙紅色子實(shí)體產(chǎn)生，說(shuō)明母種可靠，然后，取新鮮菌絲片在培養(yǎng)基表面劃過(guò)，所到之處即有菌落生長(zhǎng)，把長(zhǎng)有菌絲的培養(yǎng)基裝入經(jīng)消毒的瓶中，蓋好瓶蓋，旋轉(zhuǎn)搖晃后培養(yǎng)數(shù)天，可在表面形成許多星狀或斑點(diǎn)狀菌落，即為母種；

　　2）培養(yǎng)基配制：先將去皮馬鈴薯1000g切成蠶豆大小，冷水煮至熟而不爛，用8層紗布過(guò)濾取汁，加入蛋白胨25g、磷酸二氫鉀15g、硫酸鎂7.5g、維生素b4片，補(bǔ)水2500ml，攪拌使其無(wú)沉淀產(chǎn)生，調(diào)節(jié)ph至8，然后依次加入葡萄糖和紅糖煮沸，用濾紙、紗布或棉花趁熱將已配好的培養(yǎng)基過(guò)濾，用紗布過(guò)濾時(shí)，最好折疊成六層，用濾紙過(guò)濾時(shí)，可將濾紙折疊成瓦棱形，鋪在漏斗上過(guò)濾，制成培養(yǎng)液；

　　3）分裝：已過(guò)濾的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行分裝，分裝時(shí)，一手捏松彈簧夾，使培養(yǎng)基流出，另一只手握住幾支試管或玻璃輸液瓶，依次接取培養(yǎng)基，分裝時(shí)，注意不要使培養(yǎng)基粘附管口或瓶口，以免浸濕棉塞引起雜菌污染，液體裝量不宜超過(guò)容器總?cè)莘e的2/5，瓶口用聚丙烯塑料薄膜和乳膠圈封口，備用；

　　4）滅菌：把培養(yǎng)皿和玻璃輸液瓶每10支扎成一捆，用牛皮紙包好放入高壓鍋滅菌，采用常壓滅菌或高壓蒸汽滅菌，高壓蒸汽滅菌0.11mpa保持30分鐘；常壓滅菌100℃保持6～8小時(shí)；高壓蒸汽滅菌一定要等滅菌器的壓力降為零時(shí)，才可以開(kāi)啟滅菌器，取出培養(yǎng)皿和玻璃輸液瓶，備用；

　　6）接種：在無(wú)菌操作條件下，用接種鉤從母種斜面中切取1cm2菌面放入液體菌種培養(yǎng)瓶中，迅速用聚丙烯塑料薄膜和乳膠圈封扎瓶口；

　　7）人工培養(yǎng)：接種后放到恒溫箱里在20～28℃，恒溫培養(yǎng)2～3天，待液體菌種培養(yǎng)液面上的母種塊長(zhǎng)到直徑為2.5cm的菌塊時(shí)，再采用搖床振蕩培養(yǎng)，震蕩頻率依據(jù)搖床性能和菌種性質(zhì)等進(jìn)行適當(dāng)調(diào)節(jié)，要求培養(yǎng)的菌種菌球密度大、菌絲掛瓶壁少、培養(yǎng)周期短以及接種后定殖能力強(qiáng)、發(fā)菌快，一般往復(fù)式搖床60～70次/分鐘，旋轉(zhuǎn)式搖床100～120轉(zhuǎn)/分鐘，振蕩培養(yǎng)時(shí)間為4～6天；沒(méi)有設(shè)備條件的可采用靜止培養(yǎng)，靜止培養(yǎng)時(shí)間為7～10天；

　　8）采收：采收時(shí)，用無(wú)菌鑷子鉗出子實(shí)體，然后再加少量營(yíng)養(yǎng)液，重新包扎好瓶口，繼續(xù)培養(yǎng)，2天后又可生長(zhǎng)出第二批子座。

　　根據(jù)上述技術(shù)方案，人工培養(yǎng)菌種的溫度為18～23℃，菌種培養(yǎng)濕度60～65%，菌種培養(yǎng)光線(xiàn)為黑暗條件，菌種培養(yǎng)空氣為環(huán)境清新無(wú)異味。

　　根據(jù)上述技術(shù)方案，母種的菌種用真正無(wú)性階段菌株或用成熟的天然的子囊抱子作接種體，具備能滿(mǎn)足蟲(chóng)與菌生理、生化要求的特定條件，使蟲(chóng)菌結(jié)合實(shí)現(xiàn)侵染寄生，以使其長(zhǎng)成蟲(chóng)草子實(shí)體。

　　根據(jù)上述技術(shù)方案，人工培養(yǎng)期間定期檢查，一般每天檢查2次，及時(shí)淘汰染菌或劣勢(shì)菌種。

　　基于上述，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于，本發(fā)明有效簡(jiǎn)化了北冬蟲(chóng)夏草菌種的培養(yǎng)方法，繼而可以有效縮短了菌種的培養(yǎng)時(shí)間，提升了生產(chǎn)效率；同時(shí)也優(yōu)化了母種的制備方法，從而可以有效提高菌種的質(zhì)量。

　　盡管已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言，可以理解在不脫離本發(fā)明的原理和精神的情況下可以對(duì)這些實(shí)施例進(jìn)行多種變化、修改、替換和變型，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求及其等同物限定。Kaiyun網(wǎng)站